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滅菌生物指示劑中D值如何測定

更新時(shí)間:2022-04-25   點(diǎn)擊次數(shù):3416次

  藥品生產(chǎn)中滅菌工藝的驗(yàn)證與滅菌效果的監(jiān)控,是影響產(chǎn)品安全性的關(guān)鍵要素,也是藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范(GMP)檢查中的關(guān)注重點(diǎn)。無菌制劑的過度滅菌可能引入更多雜質(zhì),誘發(fā)質(zhì)量與安全隱患,而滅菌不充分則可能因微生物污染而導(dǎo)致藥害事件。今天,就帶大家簡單了解下衡量滅菌工藝的標(biāo)尺——滅菌生物指示劑的相關(guān)知識。

 滅菌工藝驗(yàn)證和滅菌效果監(jiān)控中使用的生物指示劑,是衡量滅菌工藝的一把尺,此類產(chǎn)品的質(zhì)量直接影響到滅菌工藝的關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)和產(chǎn)品安全性。

D值與Z值的意義與重要性:

   D值和Z值是評價(jià)滅菌生物指示劑產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)。D值即在規(guī)定滅菌溫度下,將生物指示劑產(chǎn)品中耐熱微生物殺滅90%(下降一個(gè)對數(shù)單位)所需的時(shí)間。D值越大,耐熱微生物殺滅速度越慢,該菌株的耐熱性越強(qiáng)。Z值是指使某種微生物的D值下降一個(gè)對數(shù)單位里,滅菌溫度需要升高的度數(shù),Z值越大,因溫度上升而取得的殺菌效果越小。

D值如何測定:

 實(shí)驗(yàn)步驟如下:產(chǎn)品在121℃下滅菌,設(shè)計(jì)不同的暴露時(shí)間,覆蓋全部陽性反應(yīng)、全部陰性反應(yīng)和部分陽性、陰性反應(yīng)的區(qū)間。每個(gè)暴露時(shí)間點(diǎn)所用的待測生物指示劑樣品為20支,每次暴露的樣品批次和數(shù)量相同。每次暴露程序完成后,立即按壓玻璃管,使培養(yǎng)基與含菌紙片充分接觸,55℃培養(yǎng)48h,記錄陽性/陰性反應(yīng)的指數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。

 存活孢子計(jì)數(shù)是計(jì)算D值的關(guān)鍵參數(shù),存活孢子計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于待測樣本的均勻性、耐熱菌株孢子與載體的分離程度、熱擊的溫度和時(shí)間、稀釋劑的選擇等。

 稀釋液中的離子強(qiáng)度會直接影響孢子的復(fù)蘇率,因此推薦使用滅菌純化水作為稀釋液。試驗(yàn)優(yōu)化時(shí)需以滅菌生理鹽水,含吐溫-80的滅菌生理鹽水等作為稀釋劑進(jìn)行孢子復(fù)蘇率的考察。

 此外,濕熱滅菌生物指示劑產(chǎn)品所選取的耐熱菌株嗜熱脂肪芽孢桿菌的遺傳背景、產(chǎn)品包裝材質(zhì)和復(fù)蘇培養(yǎng)基適用性也會對D值測定的結(jié)果產(chǎn)生一定影響,但產(chǎn)品制作工藝中耐熱菌株的選擇、耐熱菌株與載體的包被、菌株耐熱能力對產(chǎn)品D值也會產(chǎn)生一些波動影響。

 小結(jié):

 滅菌生物指示劑產(chǎn)品的D值本身取決于產(chǎn)品制作過程中耐熱菌株的抗性,D值測定結(jié)果收到暴露溫度、暴露壓力、升溫或降溫速率、溫度寶東興、產(chǎn)品包裝形式、復(fù)蘇培養(yǎng)基的適用性等因素影響。

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